細胞(bāo)培養流程(chéng)主(zhǔ)要分爲(wèi)：細胞複蘇、細胞傳(chuán)代(dài)、細胞凍存

上一(yī)期已經向大家(jiā)介紹了細胞複(fú)蘇的相(xiàng)關内容(róng)，這一期(qī)我們一(yī)起來(lái)了(le)解一下關于細(xì)胞傳代(dài)的相(xiàng)關(guān)内容。

一(yī)、什麽是(shì)細胞傳(chuán)代？

細(xì)胞在培養(yǎng)皿中生(shēng)長(zhǎng)一定(dìng)的時(shí)間(jiān)後(hòu)，達到(dào)對數(shù)生長(zhǎng)期，被分(fèn)開接種到新(xīn)的培養器(qì)皿中(zhōng)繼續(xù)生長或做(zuò)實驗。

二、細胞傳(chuán)代的(de)具體操作(zuò)步驟

貼 壁(bì) 細 胞(bāo)

01 從培養箱取出(chū)細胞(bāo)培養瓶（一般選(xuǎn)擇(zé)處于對(duì)數期的(de)細胞），轉(zhuǎn)移到超(chāo)淨台。棄(qì)去原有(yǒu)培養(yǎng)液(yè)，用1-2ml pbs緩沖液(yè)洗滌(dí)1次（注意從(cóng)側壁加入，以免沖掉(diào)細胞），棄去pbs緩沖液。

02 向(xiàng)培養瓶中(zhōng)加入1ml胰酶，消化(huà)，将加入(rù)胰酶的(de)細胞培養瓶轉(zhuǎn)移到倒置(zhì)顯微(wēi)鏡下觀察(chá)細胞消化情況(kuàng)，當細胞變(biàn)圓(yuán)且大量脫落(luò)時，轉移到(dào)超淨台。

03 加(jiā)入2ml完(wán)全培養(yǎng)基(jī)，終止(zhǐ)消化(huà)。用移(yí)液器充分緩慢(màn)吹打(dǎ)，使細(xì)胞能(néng)夠完全脫落。然後将(jiāng)細胞懸液(yè)轉移(yí)至15ml離心(xīn)管中，1000rpm/min離(lí)心5分鍾(zhōng)，轉移進(jìn)超淨(jìng)台，打(dǎ)開蓋(gài)子(zǐ)，棄去上(shàng)清。

04 用(yòng)1ml完全(quán)培養基重(zhòng)懸細胞團塊，制(zhì)備細胞懸液，然後将(jiāng)細(xì)胞懸液(yè)分(fèn)裝(zhuāng)進2個（或多(duō)個）含(hán)有4ml完全培(péi)養基的細胞培(péi)養瓶中，蓋(gài)上瓶蓋混勻。

05 将細胞(bāo)培養瓶放(fàng)入37℃、5%co2培(péi)養箱(xiāng)中(zhōng)繼續培(péi)養。

懸 浮 細(xì) 胞

01 從培養(yǎng)箱取出細(xì)胞培養瓶(píng)（一般選擇(zé)處于(yú)對數(shù)期的(de)細(xì)胞），轉移(yí)到超(chāo)淨(jìng)台(tái)。用移(yí)液器将(jiāng)細(xì)胞培養瓶中的細胞(bāo)液轉移至(zhì)15ml離心管中(zhōng)，1000rpm/min離心5分鍾(zhōng)，轉移(yí)進超淨台，打開(kāi)蓋(gài)子，棄去上清(qīng)。

02 用1ml完全培(péi)養基(jī)重懸細胞(bāo)團塊，制備(bèi)細(xì)胞懸液，然後(hòu)将細(xì)胞懸(xuán)液分裝進2個（或(huò)多(duō)個(gè)）含有(yǒu)4ml完全培養(yǎng)基的細胞培養瓶(píng)中(zhōng)，蓋上瓶蓋混勻(yún)。

03 将細胞(bāo)培養瓶(píng)放入(rù)37℃、5%co2培(péi)養箱中繼續(xù)培養。

注意(yì)事項

1. 實驗(yàn)過程中每次将(jiāng)物品(pǐn)拿進(jìn)超(chāo)淨台中(zhōng)前，一定要向其(qí)噴(pēn)灑75%酒精(jīng)消毒(dú)，或用酒精棉球(qiú)擦拭，防止污染(rǎn),實驗全程(chéng)無菌(jun1)操作。

2. 适度消化(huà)：細(xì)胞消(xiāo)化的時(shí)間主要取決(jué)于消化液的種類(lèi)、配制(zhì)時間(jiān)、加入培養瓶中(zhōng)的量(liàng)等，消化過程中應該注(zhù)意(yì)培養(yǎng)細胞(bāo)形态(tài)的變(biàn)化，一(yī)旦胞(bāo)質回縮，連接變松散，或有(yǒu)成片浮起(qǐ)的迹象就(jiù)要加(jiā)入含(hán)有血清的(de)培養基(jī)立即終止消(xiāo)化。